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實驗時刻
軟瓊脂克隆實驗
軟(ruan)瓊脂(zhi)克隆形成(cheng)又名非錨(mao)定依賴性生長實驗(Anehorage-independentassay），利用軟(ruan)瓊脂(zhi)為(wei)培養介質，使細胞(bao)在懸浮狀態(tai)下生長。
軟瓊脂(zhi)克隆形成實(shi)驗方(fang)法簡單(dan)，適用于貼壁生(sheng)長的細胞(bao)。
細胞克(ke)隆(long)形成(cheng)率表示接種細胞后貼壁(bi)的細胞成(cheng)活并形成(cheng)克(ke)隆(long)的數量，主要反映(ying)細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要(yao)性狀。
Part 01.
實驗材料
Part 02.
實驗操作流程
常見問題與解答
A：細胞接種(zhong)密(mi)度(du)與(yu)最終實(shi)驗結果(guo)密(mi)切(qie)相關，若細胞太多，形成克(ke)隆數目太多，處理結果(guo)時數克(ke)隆不僅容易出錯，而且(qie)圖(tu)片很難(nan)看（下圖(tu)左）。細胞太少，不能(neng)形成克(ke)隆。如下圖(tu)所示：
上圖我們看(kan)到3株癌細胞(bao)在6孔板克隆形成圖片(pian)，第(di)(di)一個明顯鋪板細胞(bao)太密(mi)集，導致難(nan)以統計數據(ju)；中間那個正好(hao)，最(zui)后面(mian)那個細胞(bao)數量偏少，且細胞(bao)鋪板不均勻(yun)。因(yin)此，為了獲得美(mei)觀的圖片(pian)和準確的數據(ju)，第(di)(di)一次實驗最(zui)好(hao)設置(zhi)細胞(bao)接種梯度，如500-1000-2000-5000個/孔挑選(xuan)出最(zui)合適的接(jie)種密度。細胞在進行克(ke)隆形成實驗時要(yao)求有(you)95%以上的分散(san)度，否(fou)則結果的準確度(du)會受(shou)到(dao)很(hen)大影響(xiang)；另外注意細胞計數時建議多計數幾次。
A：并非每種細胞都可以形成克隆，克隆形成率與細胞本身增殖能力有關。還與接種細胞密度，加入培養液的體積、血清濃度有關。因該實驗處理時間較長，應給細胞多加培養基，如每孔4ml，或者3天更換一次培養基，以供給細胞充足的營養。
END
