1. 什么(me)情況下需要使用不含酚紅的GelNest?基(ji)質膠？
對于涉及顏色(se)檢測的(de)實(shi)驗，推薦使用(yong)不含酚紅的(de)GelNest?基(ji)質膠，如(ru)使用(yong)熒(ying)光染料對內皮(pi)細胞(bao)成(cheng)管(guan)的(de)定(ding)量；
對子宮內膜細胞(bao)培養(yang)必須使(shi)用(yong)不(bu)含酚紅的GelNest?基(ji)質膠。
不含酚紅的GelNest?基質膠也可以應用于一些體內應用研究。因酚紅與一些非甾體雌激素結構相似，有顯著的雌激素活性，在實驗動物體內可能具有干擾內分泌與荷爾蒙代謝的能力。此外，酚紅是一種潛在的內分泌干擾物，有可能會干擾實驗動物體內激素的自然產生和代謝能力。
2. 高濃度GelNest?基質膠可以用于哪些實驗？
高(gao)濃度GelNest?基質膠可用(yong)于(yu)3D細胞培養、裸鼠(shu)體內成瘤(liu)實驗(yan)等體內應用(yong)研究。高(gao)濃度GelNest?基質膠的蛋白濃度高(gao)，和(he)腫瘤(liu)細胞一起皮(pi)下注射(she)到小鼠(shu)體內后保(bao)(bao)持其(qi)完整性(xing)并保(bao)(bao)持原位(wei)(wei)，以便進行(xing)原位(wei)(wei)分析或未來腫瘤(liu)的取樣。
3. 哪(na)些情況(kuang)下應該選用(yong)薄(bo)膠法/厚膠法？3D細胞(bao)培養有哪(na)些應用(yong)？
薄(bo)膠(jiao)法主要用于細胞貼壁和增(zeng)殖，如(ru)原代細胞培養僅需要一(yi)層薄(bo)薄(bo)的蛋白(bai)層輔(fu)助而非蛋白(bai)基質；
厚膠法主(zhu)要(yao)用于3D細(xi)胞(bao)培(pei)養，成環試(shi)驗(yan)，如大鼠(shu)主(zhu)動脈組織分化為毛細(xi)管樣結構，以及(ji)進行(xing)細(xi)胞(bao)侵襲實(shi)驗(yan)等(deng)。
3D細(xi)胞(bao)培養實驗(yan)，主要是(shi)用于研究細(xi)胞(bao)與細(xi)胞(bao)間的相互作用以及復雜結構(gou)等(deng)。
4. GelNest?基質膠可以(yi)用于誘導ES/iPS細胞分化的(de)研(yan)究嗎(ma)？
可以，實驗表明GelNest?基質膠可以用于ES/iPS細胞的分化研究，建議使用干細胞專用的GelNest?基質膠。
5. 如何從(cong)GelNest?基質膠中收獲(huo)細胞？
推薦使用中性蛋白酶，如分散酶來收獲培養在GelNest?基質膠中的細胞。
中(zhong)性(xing)蛋(dan)白(bai)(bai)酶(mei)(mei)相比胰蛋(dan)白(bai)(bai)酶(mei)(mei)、膠原蛋(dan)白(bai)(bai)酶(mei)(mei)或其(qi)它(ta)蛋(dan)白(bai)(bai)水解酶(mei)(mei)能夠更溫和有效地獲得(de)單(dan)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，不會(hui)損(sun)傷細胞(bao)或分裂細胞(bao)表面蛋(dan)白(bai)(bai)。對于需要繼續接種培養或生物檢測的細胞(bao)，使(shi)用(yong)中(zhong)性(xing)蛋(dan)白(bai)(bai)酶(mei)(mei)不會(hui)產生損(sun)傷，此(ci)外中(zhong)性(xing)蛋(dan)白(bai)(bai)酶(mei)(mei)也可以用(yong)于組織的分離。
也可使用相應的細胞復蘇溶液進行代謝實驗和RNA回收實驗，建議在4℃使用細胞復蘇溶液進行非酶反應的細胞收獲。
其(qi)它方法：降低(di)溫度至4-6℃使基(ji)質膠解聚，這需要(yao)一(yi)定的時間并且僅適(shi)合(he)一(yi)部分應用；或者離(li)心(xin)以(yi)破(po)壞基(ji)質膠結(jie)構。
6. 使用GelNest?基質膠(jiao)培養的細胞，如(ru)(ru)果(guo)需要進(jin)行(xing)切片或(huo)者(zhe)免疫組織(zhi)化學及免疫熒光檢驗(yan)，該怎樣固定呢？如(ru)(ru)何避免解聚？
可(ke)以使(shi)用(yong)2-4%多(duo)聚甲醛進行固定(ding)(ding)，如2-4%多(duo)聚甲醛配制在(zai)PBS中(zhong)，室溫固定(ding)(ding)20分鐘。某些情況下，在(zai)固定(ding)(ding)后可(ke)能出現解聚的情況，可(ke)以加(jia)入1%戊二醛(戊二醛作為固定(ding)(ding)劑，常(chang)用(yong)于電鏡檢測)。
如(ru)果需要進行免疫熒(ying)光檢(jian)驗，加入戊二醛(quan)后，會(hui)出現明顯(xian)的背景熒(ying)光。為(wei)了解(jie)決(jue)這一問題(ti)，建議操(cao)作中(zhong)在固定之后，使用(yong)NaBH4進行淬(cui)滅。NaBH4極易起泡，進行該步驟(zou)時，必須(xu)在水平操(cao)作臺上小心操(cao)作，避免晃動(dong)，盡量減少(shao)氣泡的形成。另(ling)外，也可以嘗試使用(yong)較低濃度(如(ru)0.1%到0.5%)的戊二醛(quan)進行固定，濃度越(yue)低，背景熒(ying)光信號越(yue)少(shao)。
7. 提取過程會(hui)引起層粘連蛋白變(bian)性嗎？
不會引起層粘連蛋白變性。
注：NEST提供的(de)各種基質膠(jiao)應用方案僅供參(can)考，實際須根據實驗目的(de)進行條件的(de)優化(hua)。
