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GelNest? 基質膠

GelNest?高(gao)濃(nong)度(du)基質膠(jiao)可(ke)(ke)適用(yong)于(yu)體內應(ying)用(yong)研究，如(ru)高(gao)濃(nong)度(du)蛋白可(ke)(ke)促進腫瘤生長。高(gao)蛋白濃(nong)度(du)同(tong)時(shi)可(ke)(ke)使GelNest?基質膠(jiao)注(zhu)射(she)入小鼠皮下后保持完整，有利于(yu)注(zhu)射(she)的腫瘤細(xi)胞和(he)/或血(xue)管生成因子的原位保持，便于(yu)用(yong)于(yu)原位分析和(he)/或以后的切除。

GelNest?基(ji)質膠選用AccureVial?COP 瓶進行包裝運輸。環烯烴聚合(he)物(wu)（COP）瓶作(zuo)為(wei)中硼硅玻璃的替代(dai)品，具有(you)極高的設計靈活性，其不(bu)易破碎的特點，也降低了物(wu)流運輸成本(ben)。

COP瓶優(you)勢：

★可耐受-196℃低溫儲存(cun)；

★較(jiao)玻璃材質而言(yan)不易破碎；

★低蛋白吸附性；

★可耐受PH值(zhi)>10的溶液，不易產生脫(tuo)片，對基(ji)質膠進行安全性保護(hu)。

GelNest?高(gao)濃度基(ji)(ji)質膠可適用(yong)于體內應用(yong)研究，如制(zhi)備厚層包被用(yong)于3D細胞培養。細胞可以嵌(qian)在GelNest?基(ji)(ji)質膠中或者接(jie)種(zhong)在GelNest?基(ji)(ji)質膠表面（覆蓋法）。

是的。因為GelNest?基質膠在(zai)高(gao)于10℃的條件下即會開始成膠，我們推薦操(cao)作基質膠時使(shi)用預(yu)冷(leng)的移液管、吸頭和離心管。

GelNest?基質(zhi)膠在10℃至35℃時會快速聚合成膠。

對于涉及顏色檢測的實(shi)驗，推薦(jian)使用無(wu)酚(fen)紅(hong)GelNest?基質(zhi)膠(jiao)，如(ru)使用熒光(guang)染料或Drabkins法(fa)計(ji)數內皮細胞成管實(shi)驗。對于子宮(gong)內膜細胞培養，也需使用無(wu)酚(fen)紅(hong)GelNest?基質(zhi)膠(jiao)。

此(ci)外(wai)，酚紅和非甾體(ti)雌(ci)(ci)激素結(jie)構類似，有類雌(ci)(ci)激素效應。在實驗(yan)動物體(ti)內可能(neng)(neng)具有干(gan)擾內分泌和荷(he)爾蒙(meng)代謝的能(neng)(neng)力。

推(tui)薦(jian)使(shi)用(yong)(yong)中性(xing)蛋白(bai)(bai)(bai)酶或(huo)細(xi)胞(bao)回(hui)收解決方案來(lai)收獲(huo)培養(yang)在GelNest?基質膠(jiao)中的細(xi)胞(bao)。中性(xing)蛋白(bai)(bai)(bai)酶相比胰酶、膠(jiao)原酶或(huo)其他蛋白(bai)(bai)(bai)水解酶能夠更溫(wen)和有效地獲(huo)得單(dan)細(xi)胞(bao)懸液，不會損傷(shang)細(xi)胞(bao)或(huo)細(xi)胞(bao)表面蛋白(bai)(bai)(bai)。對(dui)于需要(yao)繼續接種(zhong)培養(yang)或(huo)進(jin)行檢測的細(xi)胞(bao)，使(shi)用(yong)(yong)中性(xing)蛋白(bai)(bai)(bai)酶不會產生損傷(shang)。此外中性(xing)蛋白(bai)(bai)(bai)酶也可以(yi)用(yong)(yong)于組織分(fen)離(li)。

對于代謝研究和(he)RNA抽提，建議在4℃使用(yong)細胞回收解決方案進行非(fei)酶反應(ying)的(de)細胞收集。因(yin)為GelNest?基(ji)質(zhi)膠中含有痕(hen)量的(de)RNA，進行RNA分(fen)析時(shi)，應(ying)設一(yi)個GelNest?基(ji)質(zhi)膠（不接種(zhong)細胞）的(de)對照組。

其(qi)它從GelNest?基質(zhi)膠中收(shou)獲細胞的(de)方法(fa)：降低溫度至4℃-6℃使GelNest?基質(zhi)膠解聚，需要一定的(de)時間并且僅(jin)適合一部分(fen)應用(yong)。

包被(bei)過的培養(yang)皿最(zui)好當天使用(yong)，具體情(qing)況取決于實(shi)驗目(mu)的。

需要保存(cun)的情況(kuang)下，可在37°C培養箱中最多存(cun)放7天。保存(cun)時GelNest?基質(zhi)膠表面需要使用無血(xue)清培養基均勻覆蓋，保持(chi)濕潤。

薄(bo)膠(jiao)主要用于輔助細胞貼(tie)壁，有(you)利于細胞增殖(zhi)。如原(yuan)代細胞培養，需要一層薄(bo)薄(bo)的蛋白層輔助，就可以選用薄(bo)膠。

厚膠主要用于3D細胞培養(yang)，如(ru)大鼠(shu)主動脈(mo)組(zu)織(zhi)分化為(wei)毛細血管樣結構（RingAssay），以及進行(xing)細胞侵(qin)襲(xi)實驗等。3D細(xi)胞(bao)培(pei)養實驗，主要是用于研究細(xi)胞(bao)與細(xi)胞(bao)間的相(xiang)互作用以及復雜結(jie)構，如生物組織等。

進(jin)行該實驗，GelNest?基質膠最低濃度應不低于10mg/mL。

不同(tong)的實(shi)(shi)驗(yan)(yan)目的需要(yao)不同(tong)的GelNest?基質膠濃度，用戶應該(gai)根據(ju)具體的實(shi)(shi)驗(yan)(yan)需求(qiu)確定。

GelNest?基質(zhi)膠最低成(cheng)膠濃(nong)度為7mg/mL。稀(xi)釋(shi)時不(bu)(bu)要簡單進行(xing)體積倍比稀(xi)釋(shi)，不(bu)(bu)同批次間的(de)(de)GelNest?基質(zhi)膠濃(nong)度有差(cha)異，應該根據(ju)最終工作濃(nong)度(mg/mL)算出需要加入(ru)的(de)(de)稀(xi)釋(shi)液體（如(ru)PBS或無血清(qing)培養基）的(de)(de)量。

用于體內研(yan)究的GelNest?基質膠(jiao)，為(wei)了避(bi)免成膠(jiao)不(bu)完全，最終(zhong)工作(zuo)濃度不(bu)應低于10mg/mL。

基(ji)質(zhi)膠(jiao)膠(jiao)塊可以在體(ti)內(nei)維持(chi)至少一周的時(shi)間。

使用(yong)冰上預冷的(de)無(wu)血清培養基(ji)或(huo)者PH=7.4的(de)PBS。

推(tui)薦(jian)使用預冷的(de)移(yi)液(ye)器或者注射(she)器操作，移(yi)液(ye)管、槍頭同樣需要預冷。吸液(ye)時不要觸(chu)及瓶子底部；分液(ye)時切忌過(guo)快、用力過(guo)猛。

如果使用移液(ye)(ye)管(guan)（Pipets），需要分(fen)液(ye)(ye)5mL時(shi)，應該吸(xi)取6mL，分(fen)液(ye)(ye)到(dao)移液(ye)(ye)管(guan)內仍(reng)有1mL時(shi)即停止；如果使用自(zi)動移液(ye)(ye)器（Pipetman），按(an)壓到(dao)第二檔(dang)位(wei)吸(xi)液(ye)(ye)，然(ran)后(hou)按(an)壓到(dao)第一(yi)檔(dang)位(wei)進行分(fen)液(ye)(ye)。

基(ji)質(zhi)膠(jiao)的蛋(dan)白(bai)濃度越高，膠(jiao)體越粘稠。如(ru)果(guo)濃度高于13.0mg/mL，基(ji)質(zhi)膠(jiao)會顯得非常(chang)厚重。

GelNest?基質膠產品在未稀釋前(qian)都(dou)會比較粘(zhan)稠。粘稠的高濃(nong)度(du)(du)GelNest?基質(zhi)膠不稀釋也可以(yi)(yi)直接(jie)使用(yong)，如(ru)用(yong)于培(pei)養(yang)腫(zhong)瘤細胞和(he)/或(huo)血管生(sheng)成因子(zi)，注射于小鼠體內后，細胞可以(yi)(yi)保持原(yuan)位，便于原(yuan)位分析和(he)/或(huo)以(yi)(yi)后的切除；或(huo)者稀釋后，按照標(biao)準濃(nong)度(du)(du)的GelNest?基質(zhi)膠產(chan)品使用(yong)方法使用(yong)，具體稀釋濃(nong)度(du)(du)根據實驗(yan)需(xu)求確定。

除因為產品本(ben)身(shen)濃度高而粘稠外，基(ji)(ji)質膠的(de)(de)(de)狀態(tai)還與運輸(shu)過程中溫(wen)(wen)度的(de)(de)(de)變化和儲(chu)藏(zang)條(tiao)件有關(guan)。整個運輸(shu)過程中必須使(shi)用(yong)干冰(bing)冷(leng)藏(zang)。如果儲(chu)藏(zang)GelNest?基(ji)(ji)質膠的(de)(de)(de)冰(bing)箱帶有自動除霜功能，冰(bing)箱除霜過程中升溫(wen)(wen)，可能使(shi)基(ji)(ji)質膠成膠。所(suo)以，切忌將GelNest?基(ji)(ji)質膠儲(chu)藏(zang)于此類冰(bing)箱中。

為保證(zheng)GelNest?基質(zhi)膠的使用效果，凍融次(ci)(ci)數應該盡可能減少。拿到(dao)新(xin)的GelNest?基質(zhi)膠后(hou)，請(qing)按照單次(ci)(ci)用量進行分裝(zhuang)。每次(ci)(ci)融化操作，GelNest?基質(zhi)膠都應該放置(zhi)于冰上(shang)。

GelNest?基質(zhi)膠(jiao)(jiao)是一種從小鼠腫瘤中(zhong)提(ti)取(qu)的重組基底(di)膜，新鮮提(ti)取(qu)的原料中(zhong)主要包括以下成分：層粘(zhan)連蛋(dan)白，IV型膠(jiao)(jiao)原,巢(chao)蛋(dan)白，基底(di)膜聚糖(tang)、表皮生(sheng)長(chang)因(yin)子、類胰島素生(sheng)長(chang)因(yin)子及其他生(sheng)長(chang)因(yin)子。

這(zhe)些蛋白構成(cheng)了GelNest?基質膠的(de)基本結(jie)(jie)構。在22℃-37℃溫度(du)條件(jian)下(xia)，大(da)分子間的(de)共價(jia)鍵(jian)可(ke)以結(jie)(jie)合(he)，促使GelNest?基質膠形成(cheng)凝膠。而在低溫條件(jian)（如4℃）下(xia)，由于沒有足(zu)夠的(de)能量(liang)促使共價(jia)鍵(jian)結(jie)(jie)合(he)，所以GelNest?基質膠呈(cheng)現液體(ti)狀態。

建議用戶第一次融化(hua)后按照單(dan)次用量(liang)進行(xing)分裝，保存。

首先需(xu)要檢查細胞的接種濃度(du)是否過高(gao)，GelNest?基質膠的用量應等同于細胞培養(yang)體系中(zhong)培養(yang)基的用量。如果GelNest?基質膠被稀(xi)釋到過低(di)的濃度(du)，形成的膠體容易從組織培養(yang)器皿(min)表(biao)面(mian)分離。

4℃下低速離(li)心(xin)，去除沉淀物。

與細(xi)胞培養(yang)基或緩沖液(ye)混合過但(dan)未使用完的(de)GelNest?基質(zhi)膠，不建議(yi)保(bao)留(liu)再用。

是的。GelNest?基質(zhi)膠可(ke)以儲存在(zai)-70℃。建議客(ke)戶將整瓶的GelNest?基質(zhi)膠進(jin)行分裝，儲存于聚丙(bing)烯或其他可(ke)以耐受超低(di)溫條件材質(zhi)的小管(guan)中，方便(bian)保存和使用。

GelNest?基質膠是一種(zhong)蛋白混(hun)合物，所以GelNest?基質膠可(ke)能引發熒(ying)光的組分為蛋白質成分。如果需要使用(yong)(yong)熒(ying)光檢測(ce)細(xi)胞生長狀態，建議(yi)使用(yong)(yong)者建立(li)對(dui)照實驗(yan)，在所需要的波長條(tiao)件下進(jin)行對(dui)比，以便排(pai)除背(bei)景熒(ying)光。

可以使用2%濃度的多聚甲醛進行固定(ding)。為避免固定(ding)后出(chu)現解(jie)聚的情況，可以加入(ru)1%濃度的戊(wu)二醛。戊(wu)二醛作為固定(ding)劑(ji)，常用于電鏡觀(guan)察。

如果用戶(hu)需(xu)要進(jin)行免疫熒光(guang)檢驗，加入(ru)戊二醛(quan)后，會出現明顯的背(bei)景熒光(guang)。為了解決這一(yi)問題(ti)，我們建(jian)議用戶(hu)在固(gu)定之后，使用NaBH4進(jin)行淬(cui)滅(mie)。NaBH4極易產生氣泡(pao)，進(jin)行該步驟(zou)時(shi)，必須在水平操作臺上小心(xin)操作，避免晃動，盡(jin)量減少(shao)氣泡(pao)的形成。另外，用戶(hu)也(ye)可以(yi)嘗(chang)試(shi)使用較低濃(nong)度的戊二醛(quan)進(jin)行固(gu)定，如0.1%到0.5%，濃(nong)度越低，背(bei)景熒光(guang)信號越少(shao)。

因為二氧(yang)化碳和碳酸氫鹽緩(huan)沖液及酚紅(hong)的反應，冷凍(dong)或剛(gang)融(rong)解的GelNest?都有可能呈現不(bu)同顏色(se)(se)，顏色(se)(se)從(cong)稻草黃到暗(an)紅(hong)色(se)(se)不(bu)等。

酚紅(hong)在(zai)冷凍或者酸性環境(jing)下(xia)呈現(xian)明黃色(se)(se)，在(zai)接近生(sheng)理pH值或0oC以上呈現(xian)紅(hong)色(se)(se)。

GelNest?出(chu)現顏色(se)上的區別(bie)是正常情況，不會影(ying)響產品質量，并且在(zai)和(he)5%的二氧化碳(tan)平衡后，會恢(hui)復(fu)到統一顏色(se)。